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細(xì)胞增殖

簡要描述:細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征,單細(xì)胞生物以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的個(gè)體,多細(xì)胞生物以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的細(xì)胞,用來補(bǔ)充體內(nèi)衰老和死亡的細(xì)胞。

  • 更新時(shí)間:2024-10-26 00:00:00
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詳細(xì)介紹

1、CCK-8

CCK-8常應(yīng)用于檢測細(xì)胞的增殖能力。CCK-8試劑中含有WST–8:化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物(Formazan)。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,用酶標(biāo)儀在450nm波長處測定其吸光度值(OD值)來判斷活細(xì)胞數(shù)量,OD值越大,細(xì)胞活性越強(qiáng)(如果是測藥物毒性,則表示藥物毒性越小)。

2、平板克隆

單個(gè)細(xì)胞在體外增殖6代以上(時(shí)間約1周以上),其后代所形成的細(xì)胞群體,稱為集落或克隆。每個(gè)克隆含有50個(gè)以上的細(xì)胞,大小在0.3-1.0mm之間。細(xì)胞接種存活率只表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞數(shù),但貼壁后的細(xì)胞不一定每個(gè)都能增殖并形成克隆。只有同時(shí)具有貼壁和增殖活力的細(xì)胞才會形成克隆??寺⌒纬陕史从臣?xì)胞的獨(dú)立生存能力的強(qiáng)弱,用于評價(jià)細(xì)胞群體依賴性和增殖能力。由于細(xì)胞生物學(xué)性狀不同,細(xì)胞克隆形成率差別也很大,一般初代培養(yǎng)細(xì)胞克隆形成率弱,傳代細(xì)胞系強(qiáng); 二倍體細(xì)胞克隆形成率弱,轉(zhuǎn)化細(xì)胞系強(qiáng);正常細(xì)胞克隆形成率弱,腫瘤細(xì)胞強(qiáng)??寺⌒纬陕逝c接種密度有一定關(guān)系,做克隆形成率測定時(shí),接種細(xì)胞一定要分散成單細(xì)胞懸液,直接接種在培養(yǎng)皿中,持續(xù)一周以上,隨時(shí)檢查,到細(xì)胞形成克隆時(shí)終止培養(yǎng)。

3、BrdU

溴脫氧尿苷(5-溴代-2'-脫氧尿苷, BrdU) 是一種合成的核苷酸即胸苷的類似物。BrdU通常被用于檢測活組織中再生的細(xì)胞。BrdU可以摻合到復(fù)制細(xì)胞中新的合成DNA中(在細(xì)胞周期S期),在DNA復(fù)制可代替胸苷。利用抗BrdU的特異性抗體便可以用于檢測這個(gè)插入的化學(xué)品,從而檢測出細(xì)胞是否在復(fù)制其DNA。

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