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TUNEL檢測

簡要描述:TUNEL(TdT-mediated DUTP nick end labeling)細胞凋亡檢測試劑盒是用來檢測組織細胞在凋亡早期過程中細胞核DNA的斷裂情況。

  • 更新時間:2024-10-26 00:00:00
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詳細介紹

TUNEL染色操作方法:

(1)固定:將細胞爬片用0.02M PBS洗去培養(yǎng)基,再用4%甲醛固定30min,0.02M PBS洗3min×3次。

(2)消化:將細胞爬片浸入胰蛋白酶內(nèi)消化40分鐘,PBS洗3min×3次。

(3)制備TUNEL反應混合液,用50μl TdT+450μl 熒光素標記的dUTP液混勻。

(4)加50μl TUNEL反應混合液于細胞爬片上,在暗濕盒中反應37℃反應1h;PBS洗3min×3次。

(5)加50ul POD于細胞爬片上,在暗濕盒中反應37℃×30min,PBS洗3min×3次。

(6)DAB染色3-10min,自來水沖洗,蘇木素復染, 1%鹽酸酒精分化,顯微鏡下觀察,控制染色程度。

(7)脫水:75%酒精、85%酒精、95%酒精、100%酒精,逐級脫水、各3min。

(8)透明:二甲苯透明3min×2次。

(9)中性樹膠封片。 

(10)通過顯微鏡采集分析樣本相關部位,計算凋亡率。

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