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結(jié)核病的分子實(shí)驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)有哪些?

更新時(shí)間:2022-09-08 00:00:00      點(diǎn)擊次數(shù):3627

  結(jié)核病的分子實(shí)驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)有哪些?
  結(jié)核病是一種病因明確、治有辦法的疾病。它一年四季均可發(fā)病,15~35歲的人群是該病的高發(fā)人群,其潛伏期為4~8周,其中80%發(fā)生在肺部,其他部位也可繼發(fā)感染。
  該病主要經(jīng)呼吸道傳播,傳染源是接觸排菌的肺結(jié)核患者??菇Y(jié)核藥物具有殺菌、滅菌或抑菌作用,通過(guò)化療直接進(jìn)行抗菌治療效果顯著。
  但是,結(jié)核病的診斷較為困難。現(xiàn)在,我們可以利用多種實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)來(lái)診斷結(jié)核病,提高結(jié)核病診斷的特異性和敏感性。
  其中,分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)是近年來(lái)廣泛應(yīng)用的一種技術(shù)。目前,多種分子生物學(xué)檢測(cè)方法正在研發(fā)和評(píng)估之中,其敏感性較高,診斷快速,越來(lái)越受到廣大臨床醫(yī)生的青睞。
  分子實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)
  聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)可以將標(biāo)本中微量的結(jié)核桿菌DNA(脫氧核糖核酸)加以擴(kuò)增。一般情況下,顯微鏡檢查僅能檢測(cè)到104~105條菌/毫升,而PCR技術(shù)可檢測(cè)出1~100飛克的結(jié)核桿菌的DNA,相當(dāng)于1~20條菌/毫升。
  但是,在DNA提取過(guò)程中容易遭遇到污染等技術(shù)原因,從而導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性。此外,PCR技術(shù)無(wú)法區(qū)分死菌和活菌。
  因此,PCR技術(shù)不能作為結(jié)核桿菌治療效果的評(píng)估依據(jù),以及用于流行病學(xué)調(diào)查等。
  目前,我們?cè)诓捎肞CR技術(shù)的同時(shí),可以對(duì)結(jié)核桿菌耐藥相關(guān)基因(如與利福平耐藥相關(guān)的rpoB基因、與異煙肼耐藥相關(guān)的katG基因等)進(jìn)行檢測(cè)。
  分子藥物敏感試驗(yàn),也是應(yīng)用PCR技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)的,這是對(duì)耐藥位點(diǎn)突變的一種檢測(cè)方法。它包括直接測(cè)序、高分辨率溶解曲線分析、線性探針雜交、基因芯片檢測(cè)技術(shù),以及新近在國(guó)際上廣泛應(yīng)用的半巢式實(shí)時(shí)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)等。
  其中,全自動(dòng)封閉操作的半巢式實(shí)時(shí)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)檢測(cè)方便,除了可以鑒定結(jié)核桿菌之外,還能檢測(cè)利福平耐藥的分子標(biāo)記,被世界衛(wèi)生組織推薦應(yīng)用于臨床治療前的快速分子藥物敏感性檢測(cè)與菌種的鑒定。
  線性探針雜交方法與基因芯片檢測(cè)技術(shù)比較煩瑣,但是能對(duì)一線和二線的抗結(jié)核藥物敏感性進(jìn)行快速檢測(cè),并且能夠應(yīng)用在非結(jié)核桿菌的菌種鑒定上面。
  半巢式實(shí)時(shí)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)
  全自動(dòng)封閉操作的半巢式實(shí)時(shí)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(XpertMTB/RIF)技術(shù)是一種自動(dòng)化的、以實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增為基礎(chǔ)的方法,以rpoB基因?yàn)榘谢?,檢測(cè)標(biāo)本中是否含有結(jié)核桿菌以及利福平是否耐藥。整個(gè)檢測(cè)過(guò)程大約需要2小時(shí),并且具有良好的生物安全性和操作簡(jiǎn)便性。

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