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透射電鏡實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡(jiǎn)要介紹

更新時(shí)間:2022-09-08 00:00:00       點(diǎn)擊次數(shù):3793

  透射電鏡實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡(jiǎn)要介紹
  樣本制備方法:
  由于電鏡電子束穿透能力的限制,必須把標(biāo)本切成厚度小于0.1um以下的薄片才適用,這種薄片稱為超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。
  在透射電鏡的樣品制備方法中,超薄切片技術(shù)是最基本、最常用的制備技術(shù)。超薄切片的制作過程基本上和石蠟切片相似,需要經(jīng)過取材、固定、脫水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步驟。
  一取材的基本要求
  組織從生物活體取下以后,如果不立即進(jìn)行適當(dāng)處理,會(huì)由于細(xì)胞內(nèi)部各種酶的作用,出現(xiàn)細(xì)胞自溶現(xiàn)象。此外,還可能由于污染,微生物在組織內(nèi)繁殖使細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu)遭受破壞。因此,為了使細(xì)胞結(jié)構(gòu)盡可能保持生前狀態(tài),必須做到快、小、準(zhǔn)、冷:
  (1).動(dòng)作迅速,組織從活體取下后應(yīng)在最短時(shí)間內(nèi)(爭(zhēng)取在1分鐘內(nèi))投入2.5%戊二醛固定液。
  (2).所取組織的體積要小,一般不超過1mm×1mm×1mm。也可將組織修成1mm×1mm×2mm大小長(zhǎng)條形。因?yàn)楣潭▌┑臐B透能力較弱,組織塊如果太大,塊的內(nèi)部將不能得到良好的固定。
  (3).機(jī)械損傷要小,解剖器械應(yīng)鋒利,操作宜輕,避免牽拉、挫傷與擠壓。
  (4).操作最好在低溫(0℃~4℃)下進(jìn)行,以降低酶的活性,防止細(xì)胞自溶。
  (5).取材部位要準(zhǔn)確。
  取材方法:將取出的組織放在潔凈的蠟版上,滴一滴預(yù)冷的固定液,用兩片新的、鋒利的刀片成“拉鋸式”將組織切下并修小,然后用牙簽或鑷子將組織塊移至盛有冷的固定液的小瓶中。如果組織帶有較多的血液和組織液,應(yīng)先用固定液洗幾遍,然后再切成小塊固定。

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