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淺析分子克隆的原理及操作步驟

更新時間:2022-09-08 00:00:00       點擊次數(shù):3862

        克隆(clone,clon)一詞源于希臘文Klon,原意為樹木的枝條。在生物學中其名詞含義系指一個細胞或個體以無性繁殖的方式產(chǎn)生一群細胞或一群個體,在不發(fā)生突變的情況下,具有完全相同的遺傳性狀,常稱無性繁殖(細胞)系;其動詞(clone,cloned,cloning)含義指在生物體外用重組技術(shù)將特定基因插入載體分子中,即分子克隆技術(shù)。研究基因的第一步是分離它并獲得許多與它完全相同的拷貝。這稱為“克隆”基因。一個基因被克隆的過程稱為分子克隆
       分子克隆是指分離一個已知DNA序列,并以in vivo(活體內(nèi))方式獲得許多復制品的過程。這一復制過程經(jīng)常被用于增加并獲取DNA片段中的基因,但也可用來增加某些任意的DNA序列,如啟動子、非編碼序列、化學合成的寡核苷酸或是隨機的DNA片斷。
PCR技術(shù):使DNA分子先解螺旋,然后以得到的單戀為模版進行復制。

步驟:
  1.DNA變性(90℃-96℃):雙鏈DNA模板在熱作用下, 氫鍵斷裂,形成單鏈DNA
  2.退火(25℃-65℃):系統(tǒng)溫度降低,引物與DNA模板結(jié)合,形成局部雙鏈。
  3.延伸(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性較好)的作用下,以dNTP為原料,從引物的5′端→3′端延伸,合成與模板互補的DNA鏈。
  每一循環(huán)經(jīng)過變性、退火和延伸,DNA含量即增加一倍。 

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