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簡(jiǎn)析凋亡檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的目的及操作流程

更新時(shí)間:2022-09-08 00:00:00       點(diǎn)擊次數(shù):4134

凋亡檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的目的:
      掌上細(xì)胞凋亡細(xì)胞的形態(tài)特征
      通過(guò)實(shí)驗(yàn)通過(guò)用熒光探針對(duì)細(xì)胞進(jìn)行雙重標(biāo)記來(lái)檢測(cè)正常的活細(xì)胞,凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞的方法。

1、取Falcon試管,按標(biāo)本順序編好陰性對(duì)照管和標(biāo)本管號(hào)。

2、使用冷的PBS緩沖液洗細(xì)胞兩次,再用1xBinding Buffer緩沖液制成1x106細(xì)胞/ml的懸液。試劑由優(yōu)寧維生物提供。

3、Falcon試管中加入100μl 細(xì)胞懸液。

4、按以下體積加入AnnexinV與核酸染料:

5、輕輕混勻,室溫(20°C ~25°C)避光處放置15分鐘。


6、使用Annexin V-Biotin試劑進(jìn)行檢測(cè)時(shí): 
       1xBinding Buffer緩沖液洗細(xì)胞一次,去上清。 
       1xBinding Buffer緩沖液100µl溶解SAv-FITC試劑0.5µg,加入到細(xì)胞管中。 
       輕輕混勻。加入5µl PI,室溫(20-25°C)避光處放置15分鐘。 

7、各試驗(yàn)管中分別加入1xBinding Buffer緩沖液400µl。1小時(shí)內(nèi)上流式細(xì)胞儀測(cè)定結(jié)果。

注意事項(xiàng):

1、誘導(dǎo)培養(yǎng) HL-60 細(xì)胞時(shí)間要準(zhǔn)確;
2、熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞時(shí),由于熒光易碎滅,觀察時(shí)要盡量快。
 

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