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常見的類器官培養(yǎng)實(shí)例之腎臟類器官

更新時(shí)間:2023-10-17 14:02:06       點(diǎn)擊次數(shù):853

腎臟是中斷中胚層(intermediate mesoderm,IM)通過IM來源的后腎間質(zhì)(metanephric mesenchyme,MM)和成形 的輸尿管芽(ureteric bud,UB) 相互作用分化而成。MM來源的腎祖細(xì)胞是腎單位的前體,而IM自身則源于后部原條 (posterior primitive streak)。


在經(jīng)輻照的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞上培養(yǎng)人類胚胎干細(xì)胞鋪板于包含Matrigel的96孔培養(yǎng)板中,過夜培養(yǎng)后加入含有Activin A和BMP-4,或僅含有CHIR 99021的無血清培養(yǎng)基,然后在含有FGF-9和肝素的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)中斷中胚層細(xì)胞的形成。這些細(xì)胞隨后在含有FGF-9、BMP-7和維甲酸(前者用Activin A/BMP-4誘導(dǎo)的細(xì)胞)或含有FGF-9和肝素(前者只用CHIR 99021誘導(dǎo)的細(xì)胞)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。在誘導(dǎo)腎臟類器官時(shí),將來源于人類胚胎干細(xì)胞的腎臟細(xì)胞分離成單個(gè)細(xì)胞,離心形成細(xì)胞沉淀,然后將其鋪于覆有IV型膠原蛋白的濾膜上,并使濾膜懸浮在培養(yǎng)基中。該研究成功地利用化學(xué)成分明確的培養(yǎng)條件和參與正常胚胎發(fā)育的生長(zhǎng)因子,使人類胚胎干細(xì)胞分化生成 輸尿管芽和后腎間質(zhì),最終在體外自我組織形成含有腎單位的三維結(jié)構(gòu)。

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